酶免ELISA試劑盒的試劑性質(zhì)如下：

　　一、抗體的酶標記方法及標記效果測定

　　1、標記方法

　　良好的酶結(jié)合物取決于兩個條件：即高效價的抗體和高活性的酶?？贵w的活性和純度對制備標記抗體至關(guān)重要，因為特異性免疫反應(yīng)隨抗體活性和純度的增加而增強。在酶標記過程中，抗體的活性有所降低，故需要純度高、效價高及抗原親和力強的抗體球蛋白，最好使用親和層析提純的抗體，可提高敏感性，而且可稀釋使用，減少非特異性吸附。

　　2、酶標抗體標記效果測定：

　　測定內(nèi)容包括酶和抗體活性、結(jié)合物中酶含量和IgG含量、酶與IgG摩爾比值以及結(jié)合率。

　?。?）結(jié)合物的定量測定 一般是對結(jié)合物中的酶和IgG進行定量測定。常用紫外分光光度計于403nm和280nm進行測定，然后按下列公式計算：

　　酶量（mg/ml）=OD403×0.42

　　IgG量（mg/ml）=（OD280——OD403×0.4）×0.94×0.62

　　對于過碘酸鈉氧化法制備的標記抗體量，按下列公式計算：

　　IgG量（mg/ml）=（OD280——OD403×0.34）×0.62

　　已知酶量和IgG量后，即可計算出標記抗體的摩爾（mol）比值。

　　HRP/IgG摩爾比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4

　　結(jié)合物中酶總量=HRP（mg/ml）×結(jié)合物溶液量

　　結(jié)合物產(chǎn)率=結(jié)合物中酶總量/標記時加入的酶量×100%

　　二、基本原理

　　酶免ELISA試劑盒基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結(jié)合，此種結(jié)合不會改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此，可通過底物的顏色反應(yīng)來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒)檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來，ELISA(方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

　　三、用于標記的酶

　　用于標記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室溫下穩(wěn)定；反應(yīng)產(chǎn)物易于顯現(xiàn)；能商品化生產(chǎn)。目前應(yīng)用較多的有辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP應(yīng)用最廣。

　　1、辣根過氧化物酶（HRP）過氧化物酶廣泛分布于植物中，辣根中含量最高，從辣根中提取的稱辣根過氧化物酶（HRP），是由無色酶蛋白和深棕色的鐵卟啉構(gòu)成的一種糖蛋白（含糖量18%），分子量約40 000，約由300個氨基酸組成，等電點為pH 3-9，催化反應(yīng)的最適pH值因供氫體不同而稍有差異，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%飽和度以下的硫酸銨溶液。酶蛋白和輔基的最大吸收光譜分別為275nm和403nm。

　　酶的純度以RZ表示：RZ=OD403/OD275

　　2、堿性磷酸酶系從小牛腸粘膜和大腸桿菌中提取，由多個同功酶組成。它們的底物種類很多，常用者為硝基苯磷酸鹽，廉價無毒性。酶解產(chǎn)物呈黃色，可溶，最大吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反應(yīng)系統(tǒng)中，37℃1分鐘水解1μg磷酸苯二鈉為一個單位。

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