色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲等組成，是裝填有固定相用以分離混合組分的柱管，多為金屬或玻璃制作，有直管形、盤(pán)管形、U形管等形狀。色譜柱可分為填充柱和開(kāi)管柱兩大類(lèi)，液相色譜通常均采用填充柱，色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。

　　誤區(qū)1 空氣會(huì)徹底毀滅一根HPLC色譜柱

　　當(dāng)色譜柱不與色譜儀連接的時(shí)候，用戶(hù)需確保色譜柱被緊緊地密封。事實(shí)上，實(shí)際的應(yīng)用中是，即使柱的端部進(jìn)入了少量的空氣也不要緊。因?yàn)楫?dāng)你將色譜柱連接到色譜儀上使用時(shí)，在系統(tǒng)初始加壓階段，在很短的時(shí)間內(nèi)空氣就會(huì)被溶劑沖刷掉。所以，不要因?yàn)樯V柱進(jìn)入了空氣而認(rèn)定色譜柱已被損壞。

　　誤區(qū)2 所有的C18（L1）色譜柱都是一樣的

　　美國(guó)藥典委員會(huì)（USP）開(kāi)發(fā)了一種分類(lèi)系統(tǒng)，用來(lái)對(duì)每種類(lèi)型的鍵合相柱進(jìn)行分類(lèi)。由于C18色譜柱是一種廣泛應(yīng)用的色譜柱，故該系統(tǒng)將其稱(chēng)為“L1”?？上Р恍业氖?，大約有800種以上的L1流入了市場(chǎng)，因此，事實(shí)證明這個(gè)系統(tǒng)是不可靠的，是一個(gè)令人困惑的系統(tǒng)。

　　因?yàn)槊糠N商品化的C18色譜柱，雖然同樣是選用硅膠作為基體，但各自都有自己特定的填料鍵合合成工藝，因此色譜性能也不相同。

　　譬如，有的生產(chǎn)廠商采用十八烷基一氯硅烷鍵合試劑和低表面積的硅膠（見(jiàn)圖一所示），而其它一些廠家采用同一硅烷試劑但選用了表面積更高的硅膠基體。

　　這兩種C18柱表現(xiàn)的色譜性能不同，后者C18固定相的鍵合比例大于前者。較低的固定相鍵合比率，表面未反應(yīng)的硅醇基較多，有時(shí)混合保留機(jī)理起主要作用。

　　某些色譜柱生產(chǎn)商使用二氯硅烷和三氯硅烷作鍵合試劑，將鍵合相聚合反應(yīng)形成一很厚的具有不同擴(kuò)散特性的疏水層。為使鍵合后硅膠表面未反應(yīng)的硅醇基比例降低，有些生產(chǎn)商用小分子的硅烷試劑（如三甲基氯硅烷）封尾。

　　硅醇基是在中性條件下測(cè)定堿性物質(zhì)時(shí)導(dǎo)致色譜峰拖尾的原因之一，有些生產(chǎn)廠家，更進(jìn)一步的做法是采用第二種小分子硅烷進(jìn)行雙封尾工藝，以提供一個(gè)更加惰性（疏水性）的硅膠表面。

　　另外有些生產(chǎn)商采用聚合物基體材料進(jìn)行C18 鍵合，生產(chǎn)出一種完全不同的C18填料，但仍然被歸類(lèi)到“L1”。還有廠家采用反應(yīng)性能不同的硅烷化試劑organoalkoxysilanes，制造出一種與氯硅烷反應(yīng)產(chǎn)生的不同的C18 固定相。

　　誤區(qū)3 反相色譜柱不可以使用純水相

　　這個(gè)誤解其實(shí)是起源于有些用戶(hù)在使用低有機(jī)溶劑含量或者純水作為反相色譜柱的流動(dòng)相時(shí)，發(fā)生了俗稱(chēng)相塌陷的現(xiàn)象，所以大家就認(rèn)為反相色譜柱不可以使用純水相。

　　許多色譜工作者都被相塌陷現(xiàn)象和保留時(shí)間位移現(xiàn)象困擾著，甚至已經(jīng)失去了努力尋找解決途徑的耐心。因此，他們索性就認(rèn)為不應(yīng)該在反相色譜柱中運(yùn)行水含量很高的流動(dòng)相。

　　然而，事實(shí)上市售的反相色譜柱（如極性嵌入和極性封端柱）都是具有水浸潤(rùn)性的，其表面特性是允許使用純水的，而不會(huì)導(dǎo)致塌陷或者保留時(shí)間移位。

　　比如科思美析COSMOSIL的C18-PAQ系列則可以使用100%水作為流動(dòng)相，適合分離親水型化合物，并相較于傳統(tǒng)的十八烷基鍵合硅膠色譜柱，具有很強(qiáng)的抗酸性。

　　誤區(qū)4 至少需要10個(gè)柱體積才能重新使LC色譜柱達(dá)到平衡

　　平衡時(shí)間對(duì)于梯度色譜來(lái)說(shuō)是非常重要的，因?yàn)樗钦麄€(gè)技術(shù)的限制因素。這有兩種平衡類(lèi)型：重復(fù)平衡和完全平衡。重復(fù)平衡也就意味著在無(wú)法實(shí)現(xiàn)完全平衡的情況下達(dá)到的平衡。

　　實(shí)際上，如果在隨后的運(yùn)行中，保留時(shí)間的重復(fù)性是小于0.002 min的，然后對(duì)于非離子化溶質(zhì)的無(wú)緩沖洗脫劑和堿性化合物以常用的三氟乙酸和甲酸為添加劑的話，重復(fù)平衡在兩個(gè)柱體積的范圍內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)。

　　誤區(qū)5 相較之純的多孔粒子，表面多孔顆粒會(huì)顯著降低樣品容量

　　HPLC色譜柱填料對(duì)樣品的容量是與其表面積成正比的，這與硅醇基通過(guò)單體鍵合形成的化學(xué)鍵合相的量相關(guān)。然而，研究結(jié)果表明：在相同的試驗(yàn)條件下，表面多孔顆粒與多孔粒子對(duì)樣品的容量是基本上相同的。

　　誤區(qū)6 UHPLC填料柱比常見(jiàn)的HPLC填料柱更容易堵塞

　　隨著柱填料多孔材料粒徑的不斷減小，使得柱的主要硬件設(shè)計(jì)跟著一起發(fā)生變化。對(duì)于sub-2μm UHPLC柱的堵塞，是樣品和流動(dòng)相物質(zhì)倒伏在柱入口的結(jié)果。如果你在進(jìn)樣前對(duì)樣品進(jìn)行了凈化，如使用固相萃取、過(guò)濾或離心等，就可以避開(kāi)任何污染問(wèn)題。

　　誤區(qū)7 保護(hù)柱是沒(méi)必要的

　　使用保護(hù)柱有很多好處。首先，保護(hù)柱可以防止化學(xué)物質(zhì)或顆粒物損壞分析柱。其次，相較之更換一根昂貴的分析柱，更換一根5mm 的保護(hù)柱只需要很少的花費(fèi)。現(xiàn)代的保護(hù)柱具有幾乎無(wú)死體積、更換快速，以及適用于UHPLC的高壓等優(yōu)點(diǎn)。

　　誤區(qū)8 你不可以將HPLC色譜柱反接以便于沖洗掉其中的顆粒物

　　實(shí)際上HPLC色譜柱的填裝壓力比最大使用壓力高很多（通常會(huì)高2倍）。如果裝柱時(shí)使用了恰當(dāng)?shù)膭驖{劑，并且分配一定的時(shí)間使柱床穩(wěn)定，一支填裝良好的色譜柱是完全可以雙向使用的。

　　液相色譜柱上基本都有->標(biāo)志，表示流動(dòng)相的流動(dòng)方向，有的在色譜柱上印有“Nerver Lot Flow in the Opposite Direction”字樣，翻譯成“決不能反沖”的意思，色譜柱可以反沖嗎、色譜柱能不能反沖的問(wèn)題爭(zhēng)議很大，但在我們工作中，用色譜柱反沖技術(shù)修復(fù)色譜柱可以收到柱效提高、柱效恢復(fù)的效果。

　　一、分析氨基酸的離子交換柱，使用一段時(shí)間反柱效明顯下降，用NaOH活化，達(dá)不到要求，但用NaOH反沖活化可迅速恢復(fù)柱效。

　　二、色譜柱使用一段時(shí)間后柱效下降，此時(shí)可拆下柱入口端螺帽，去掉1-2mm被污染填料，再用相同填料填滿(mǎn)，然后用流動(dòng)相反沖一下，可使柱效恢復(fù)，因反沖可以改善柱頭死空間。

　　三、因反沖可把沉積在過(guò)渡板上的細(xì)微顆粒沖走，有時(shí)也可用反沖技術(shù)使柱壓降低。

　　反向使用色譜柱有一個(gè)例外，就是生產(chǎn)商在色譜柱的進(jìn)樣端使用了孔徑更大篩板的情況，反向使用可能會(huì)將填料從柱床沖出。如果制造商在柱的入口處使用的是高孔隙率的玻璃料，那么將柱反沖的話，可能會(huì)將柱填料從填充床上沖洗掉。

　　色譜柱在工廠填裝時(shí)，出口端的篩板孔徑必須比色譜柱中最小顆粒的粒徑還要小。譬如，色譜填料平均粒徑是5μm，粒徑分布范圍是3-7μm，出口端篩板孔徑必須小于3μm，使填料沒(méi)有可能從柱床跑到色譜柱篩板外面。

　　大多數(shù)生產(chǎn)廠家選擇的篩板孔徑是2μm。 至于某些廠家兩端的柱篩板孔徑不一樣，一般是進(jìn)樣端大些，出樣端小些。因此，一些制造商會(huì)在柱子標(biāo)簽處放置一個(gè)箭頭指示，表明必須僅在一個(gè)方向上使用。可以肯定有這種可能性，所以一個(gè)色譜工作者應(yīng)該好好閱讀色譜柱手冊(cè)或說(shuō)明書(shū)，或與制造商確定這根色譜柱是否可以反沖。

　　誤區(qū)9 色譜柱填料粒徑越小、壓力越高，分離效果越好

　　超小的粒徑以及超高的柱壓，并不一定是色譜工作者的最佳選擇！現(xiàn)代色譜柱的柱特性研究已經(jīng)引發(fā)出一些新方法來(lái)評(píng)估一根色譜柱的性能。例如，采用新的表面多孔材料的色譜柱，其柱效與sub-2μm UHPLC柱效一樣好，然而與常規(guī)的LC填料色譜柱比起來(lái)，柱壓很低。

　　誤區(qū)10 柱壓不會(huì)影響色譜分離效果

　　色譜的很多參數(shù)都是受柱壓影響的，包括部分溶質(zhì)的摩爾體積、停滯體積、柱孔隙度、保留因子、流動(dòng)相密度、介電常數(shù)、固定相結(jié)構(gòu)、pH值和電離常數(shù)等。為什么柱壓引起了越來(lái)越多的關(guān)注呢？原因是市售的色譜儀很多是超高壓色譜儀和色譜柱。

　　當(dāng)色譜柱在約2000psi（13.789MPa）壓力下運(yùn)行時(shí)，即使保留時(shí)間上存在小差異，也并不會(huì)引起我們的注意；特別是如果重復(fù)性較好及定量不受影響的時(shí)候。但是，當(dāng)柱壓接近2000psi（13.789MPa）時(shí)，柱壓的影響可能就相當(dāng)明顯了。