根據(jù)分離機(jī)制的不同，高效液相色譜法可分為下述幾種主要類型：1 。液 — 液分配色譜法Liquid-liquid Partition Chromatography及化學(xué)鍵合相色譜Chemically Bonded Phase Chromatography流動(dòng)相和固定相都是液體。流動(dòng)相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個(gè)明顯的分界面。當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時(shí)，服從于下式：

　　式中，cs—溶質(zhì)在固定相中濃度;cm--溶質(zhì)在流動(dòng)相中的濃度; Vs—固定相的體積;Vm—流動(dòng)相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決于K，K大的組分保留值大;但也有不同之處，GPC中，流動(dòng)相對(duì)K影響不大，LLPC流動(dòng)相對(duì)K影響較大。

　　a. 正相液 — 液分配色譜法Normal Phase liquid Chromatography: 流動(dòng)相的極性小于固定液的極性。

　　b. 反相液 — 液分配色譜法Reverse Phase liquid Chromatography: 流動(dòng)相的極性大于固定液的極性。

　　c. 液 — 液分配色譜法的缺點(diǎn)：盡管流動(dòng)相與固定相的極性要求完全不同，但固定液在流動(dòng)相中仍有微量溶解;流動(dòng)相通過(guò)色譜柱時(shí)的機(jī)械沖擊力，會(huì)造成固定液流失。上世紀(jì)70年代末發(fā)展的化學(xué)鍵合固定相（見(jiàn)后），可克服上述缺點(diǎn)?，F(xiàn)在應(yīng)用很廣泛（70——80%）。

　　液 — 固色譜法流動(dòng)相為液體，固定相為吸附劑（如硅膠、氧化鋁等）。這是根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來(lái)進(jìn)行分離的。其作用機(jī)制是：當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱時(shí)，溶質(zhì)分子 X 和溶劑分子S對(duì)吸附劑表面活性中心發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)吸附（未進(jìn)樣時(shí)，所有的吸附劑活性中心吸附的是S），可表示如下：Xm nSa ====== Xa nSm式中：Xm--流動(dòng)相中的溶質(zhì)分子;Sa--固定相中的溶劑分子;Xa--固定相中的溶質(zhì)分子;Sm--流動(dòng)相中的溶劑分子。

　　當(dāng)吸附競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)達(dá)平衡時(shí)：K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa]式中：K為吸附平衡常數(shù)。[討論：K越大，保留值越大。]3 。離子交換色譜法Ion-exchange ChromatographyIEC是以離子交換劑作為固定相。IEC是基于離子交換樹(shù)脂上可電離的離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子進(jìn)行可逆交換，依據(jù)這些離子以交換劑具有不同的親和力而將它們分離。

　　以陰離子交換劑為例，其交換過(guò)程可表示如下：X-溶劑中 樹(shù)脂-R4N Cl-=== 樹(shù)脂-R4N X- Cl- 溶劑中當(dāng)交換達(dá)平衡時(shí)：KX=[-R4N X-][ Cl-]/[-R4N Cl-][ X-]分配系數(shù)為：DX=[-R4N X-]/[X-]= KX [-R4N Cl-]/[Cl-][討論：DX與保留值的關(guān)系]凡是在溶劑中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法來(lái)進(jìn)行分離。

　　4 。離子對(duì)色譜法Ion Pair Chromatography離子對(duì)色譜法是將一種 或多種 與溶質(zhì)分子電荷相反的離子 稱為對(duì)離子或反離子 加到流動(dòng)相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水型離子對(duì)化合物，從而控制溶質(zhì)離子的保留行為。其原理可用下式表示：X 水相 Y-水相 === X Y-有機(jī)相式中：X 水相--流動(dòng)相中待分離的有機(jī)離子（也可是陽(yáng)離子）;Y-水相--流動(dòng)相中帶相反電荷的離子對(duì)（如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等）;X Y---形成的離子對(duì)化合物。

　　當(dāng)達(dá)平衡時(shí)：KXY = [X Y-]有機(jī)相/[ X ]水相[Y-]水相根據(jù)定義，分配系數(shù)為：DX= [X Y-]有機(jī)相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相[討論：DX與保留值的關(guān)系]離子對(duì)色譜法特別是反相發(fā)解決了以往難以分離的混合物的分離問(wèn)題，諸如酸、堿和離子、非離子混合物，特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等分離。

　　5 。離子色譜法Ion Chromatography用離子交換樹(shù)脂為固定相，電解質(zhì)溶液為流動(dòng)相。以電導(dǎo)檢測(cè)器為通用檢測(cè)器，為消除流動(dòng)相中強(qiáng)電解質(zhì)背景離子對(duì)電導(dǎo)檢測(cè)器的干擾，設(shè)置了抑制柱。試樣組分在分離柱和抑制柱上的反應(yīng)原理與離子交換色譜法相同。

　　以陰離子交換樹(shù)脂（R-OH）作固定相，分離陰離子（如Br-）為例。當(dāng)待測(cè)陰離子Br-隨流動(dòng)相（NaOH）進(jìn)入色譜柱時(shí)，發(fā)生如下交換反應(yīng)（洗脫反應(yīng)為交換反應(yīng)的逆過(guò)程）：

　　抑制柱上發(fā)生的反應(yīng)：R-H Na OH- === R-Na H2OR-H Na Br- === R-Na H Br-可見(jiàn)，通過(guò)抑制柱將洗脫液轉(zhuǎn)變成了電導(dǎo)值很小的水，消除了本底電導(dǎo)的影響;試樣陰離子Br-則被轉(zhuǎn)化成了相應(yīng)的酸H Br-，可用電導(dǎo)法靈敏的檢測(cè)。

　　6 ?？臻g排阻色譜法Steric Exclusion Chromatography空間排阻色譜法以凝膠 gel 為固定相。它類似于分子篩的作用，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多，一般為數(shù)納米到數(shù)百納米。溶質(zhì)在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來(lái)進(jìn)行分離，而是按分子大小進(jìn)行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質(zhì)的流動(dòng)力學(xué)體積或分子大小有關(guān)。試樣進(jìn)入色譜柱后，隨流動(dòng)相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過(guò)。在試樣中一些太大的分子不能進(jìn)入膠孔而受到排阻，因此就直接通過(guò)柱子，首先在色譜圖上出現(xiàn)，一些很小的分子可以進(jìn)入所有膠孔并滲透到顆粒中，這些組分在柱上的保留值最大，在色譜圖上最后出現(xiàn)。