導讀：梯度高效液相色譜儀在進行多成分的復雜樣品分離時，經(jīng)常會碰到前面的一些成分分離不完全，后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰形較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內(nèi)全部洗脫并相互分離，往往要用到梯度洗脫技術(shù)。

　　影響梯度高效液相色譜儀洗脫的因素

　　梯度高效液相色譜儀進行洗脫時，選定溶劑A、B之后，設定梯度速度和梯度時間，確定梯度曲線形狀，要以最經(jīng)濟的梯度洗脫程序，實現(xiàn)樣品的最佳化分離。影響梯度洗脫的因素有：

　　1、溶劑的純度要高，否則會使梯度洗脫的重現(xiàn)性變壞。

　　2、梯度混合的溶劑互溶性要好，應防止不互溶的溶劑進入色譜柱。

　　3、注意溶劑的粘度和密度對混合流動相組成的影響。

　　4、梯度洗脫應使用對流動相組成變化不敏感的選擇型檢測器，而不能使用對流動相組成變化敏感的通用型檢測器。

　　一、工作原理： 流動相由兩種（或多種）不同極性的溶劑組成，通過改變流動相中各溶劑組成的比例而改變流動相的極性、PH值和離子強度，使每個流出的組分都有合適的容量因子，并使樣品的所有組分在最短時間內(nèi)實現(xiàn)最佳分離。

　　二、類型：

　　1、低壓梯度： 只需一臺高壓輸液泵，比例閥在泵之前，溶液在常壓（低壓）下混合。 簡單，經(jīng)濟，只需一個泵，所用溶劑的元數(shù)沒有限制。

　　2、高壓梯度： 采用兩臺高壓輸液泵，分別按設定的比例各輸送一種溶液至混合器，混合器在泵之后，兩種溶液在高壓狀態(tài)下混合。 流量精度高，溶劑的可壓縮性和熱力學體積的變化可能影響輸入色譜柱中溶劑的組成。

　　三、實現(xiàn)方式： 對于復雜樣品，線性梯度是最好的。 正相色譜中，常用二氯甲烷加入正己烷來實現(xiàn)。 反相色譜中，乙腈、甲醇加入水中是最常用的。

　　四、特點：

　　1、優(yōu)點： 分離復雜混合物，使所有組分都處在最佳的k值范圍內(nèi)。

　　2、缺點： 檢測器的使用受到限制，分析結(jié)果的重復性取決于流速的穩(wěn)定性，色譜柱需進行再生處理。